蛋白质修饰组学
基于高分辨率 Orbitrap 质谱平台,提供 DIA 高通量蛋白质组与代谢流定量分析,覆盖乳酸化、巴豆酰化及全谱系翻译后修饰。
乳酸化 (Lactylation) 修饰组学
乳酸化(Lactylation)是近年来生命科学前沿最瞩目的蛋白质翻译后修饰(PTM)之一。它主要是由于在糖酵解过程中,细胞通过葡萄糖转化为丙酮酸,并在缺氧或特定生理病理条件下积累乳酸。积累的乳酸在特定酶的催化下与蛋白质赖氨酸残基反应,形成乳酸化赖氨酸(K-la)。
乳酸化修饰直接参与了基因表达调节(如组蛋白乳酸化直接重塑染色质结构并激活转录)、信号传导调节(调节信号通路中关键节点的活性)以及细胞代谢调控(反馈调节代谢通路关键限速酶活性)。在肿瘤免疫微环境重塑、巨噬细胞极化切换、血管新生等领域,乳酸化已成为破译代谢-转录偶联的黄金钥匙。
速帛技术优势
- 01
高效捕获富集:自研优化了高特异性乳酸化修饰抗体结合磁珠前处理技术,最大程度提取低丰度乳酸化多肽。
- 02
高分辨率质谱:基于高端 Orbitrap 液质联用平台,采用 DIA(数据非依赖采集)技术进行无偏定量,CV 误差显著低于行业平均水平。
- 03
项目定制联合专家组:速帛为每个项目配备博士领衔的科研团队,实行全流程 QC,保证原始数据的 100% 真实客观。
高通量乳酸化生物信息分析内容
本服务交付内容除标准修饰位点详情表(含修饰主蛋白、修饰位点标签、修饰位点两侧序列等)外,还包含完整的深度生物信息分析图表:
| 生信分析模块 | 分析原理与交付产物 |
|---|---|
| 1. 鉴定多肽与位点 QC | 评估肽段长度分布图、鉴定乳酸化位点数量统计柱状图,直观展现项目数据饱满度。 |
| 2. 蛋白修饰基序 Motif 分析 | 基于 Motif-x 算法(width=31, P<1e-6),预测靶标修饰残基附近的保守氨基酸基序,交付 Motif-Logo 概率图与 Motif-Heatmap 热图,锁定潜在结合基序。 |
| 3. 样本降维与聚类分析 | 提供 PCA(主成分分析)三维/二维散点图及样本层级聚类图(Hierarchical Clustering),验证生物学重复性与组间距离。 |
| 4. 差异修饰位点统计 | 基于严格的差异筛选标准(p<0.05 且 FC >2 或 FC <0.5),交付差异统计 Volcano 火山图、差异蛋白互作网络(PPI)以及 KEGG/GO 功能通路富集气泡图。 |
送样要求
修饰多肽富集对初始样本量和样本活性要求较高,送样前请务必仔细评估:
| 样品类型 | 起始量要求 | 提取与冻存建议 | 运输形式 |
|---|---|---|---|
| 新鲜动物组织 | ≥ 100 mg / 样(湿重) | 剥离后迅速置于液氮中速冻,切忌反复冻融 | 干冰密封空运(加足干冰) |
| 新鲜植物组织 | ≥ 500 mg / 样 | 冰袋洗涤,滤纸吸干,剪碎后液氮速冻 | 干冰密封运输 |
| 细胞沉淀 | ≥ 1 × 10^7 cells / 样 | 离心收集细胞,PBS 清洗,去除上清后液氮速冻 | 干冰密封运输 |
| 血清 / 血浆 | ≥ 500 μL / 样 | 采血后尽快离心分离(避免溶血),分装后速冻 | 干冰密封运输 |
巴豆酰化 (Kcr) 修饰组学
赖氨酸巴豆酰化(Lysine Crotonylation, Kcr)是一种高度保守的非乙酰化酰化修饰,由高灵敏定量质谱技术奠基者赵英明教授团队首次发现并报道。巴豆酰辅酶 A(Crotonyl-CoA)是其直接的酰基供体。
研究表明,组蛋白上的巴豆酰化主要富集于活跃的基因启动子及增强子区域,其调控基因表达的能力显著强于传统的乙酰化修饰。此外,非组蛋白巴豆酰化广泛分布于多种细胞器蛋白中,参与细胞骨架重组、精子细胞分化、逆境应答、以及能量代谢调控等核心生命活动。
技术优势
- 01
领先的湿实验前处理:团队对巴豆酰化前端富集液与特异性抗体进行科学配比设计,背景洗脱极其干净,极大地降低了非特异性吸附。
- 02
多样本定量高精度:支持 DDA 色谱串联质谱、iTRAQ/TMT 标记或 DIA 无标定量,满足不同样本数量的对照性研究需求。
巴豆酰化生物信息分析交付物
速帛干实验事业部提供高度规范的巴豆酰化数据交付体系,帮助科研团队实现“数据到文章”的跨越:
- 修饰位点与表达图谱:巴豆酰化肽段长度分布图、蛋白上修饰位点分布图(评估单个蛋白修饰位点密度)。
- 保守 Motif 序列提取:预测赖氨酸附近的化学保守基序(如 Lys 附近富集的酸性/碱性/疏水性氨基酸分布),以 Logo 和 Heatmap 形式展现。
- 差异巴豆酰化定量分析:提供组间差异分析(火山图)、差异蛋白互作网络(PPI)、KEGG 代谢通路及 GO 功能富集分析,追踪修饰对表型通路的实际调控作用。
巴豆酰化前处理送样参数推荐(如需微量组织或活检穿刺送样,请提前与速帛技术支持沟通):
| 样品类型 | 起始量要求 | 运输及冻存建议 |
|---|---|---|
| 动物组织 | 100 - 150 mg / 样 | 干冰密封空运(加足干冰,包装防挤压) |
| 植物组织 | 500 - 800 mg / 样 | 迅速清理,吸干水分,液氮速冻,干冰密封运输 |
| 细胞沉淀 | ≥ 1 × 10^7 cells / 样 | 细胞培养收集后,PBS 洗涤去上清,液氮速冻,干冰运输 |
高通量修饰蛋白质组学全谱系服务
速帛科技湿实验事业部凭借深厚的前端富集积淀,已建立起全谱系、标准化的翻译后修饰(PTM)捕获验证平台。除乳酸化与巴豆酰化外,我们还提供以下主流与新型酰化修饰检测:
| 修饰类别 | 英文简称 | 生物学意义与研究热点 |
|---|---|---|
| 乙酰化 | Acetylation (Kac) | 研究最成熟的修饰之一,控制基因转录、蛋白质交互、以及代谢限速酶活性。 |
| 磷酸化 | Phosphorylation (Kph) | 控制几乎所有细胞信号传导通路的开关,在肿瘤药物靶点及信号级联中是核心靶向机制。 |
| 泛素化 | Ubiquitination (Kub) | 标记靶蛋白降解(PROTAC 研发底座)、调节内吞和 DNA 修复。 |
| 2-羟基异丁酰化 | 2-Hydroxyisobutyrylation (Khib) | 新型非乙酰化修饰,分布广泛,与活性染色质调控、代谢应答及基因表达密切相关。 |
| β-羟基丁酰化 | β-Hydroxybutyrylation (Kbhb) | 响应生酮反应的组蛋白修饰,介导饥饿和临床糖尿病状态下的基因转录调节。 |
| 其它修饰 | 甲基化、丙酰化、丙二酰化、戊二酰化、琥珀酰化、硝基化等 | 适用于特异性生理胁迫、宿主-微生物互作、以及各种极性细胞调控网络。 |
速帛 PTM 平台技术保障
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高质控富集配方:湿实验事业部对所有类型修饰均建立特异性抗体亲和力数据库,保证非特异性残留极低。
- 02
大样本极低误差:结合自动化前处理工作站,消除人工操作引起的系统技术变异,确保大临床队列研究的高平行性与数据完整性。
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一站式干湿闭环服务:从样品收集、湿实验提取富集、高端质谱检测到干实验高级生信分析,再到成果转化的一站式服务,免去跨平台数据衔接障碍。
双重组学大促销 · 助力高水平科研发表
乙酰化、泛素化、磷酸化促销套餐:仅需 1888 元 / 样本(常规样本及穿刺微量样本均适用)
- 蛋白抽提:常规组织/细胞,以及微量穿刺样本蛋白特异性抽提;
- 质谱上机:DIA(数据非依赖采集)高通量蛋白质组质谱上机检测;
- 修饰富集:任选一种修饰(乙酰化 / 泛素化 / 磷酸化)前端高特异性抗体富集;
- 搜库与生信分析:标准搜库 + 差异修饰位点分析 + 序列基序(Motif-logo 概率图形)分析 + 售后技术支持。
高通量修饰蛋白质组学流程
速帛科技采用标准、高效的实验流,确保微量与穿刺样本的数据稳定性:
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蛋白裂解 (Protein Lysate):提取细胞或组织(包含穿刺样本)的总蛋白。
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酶解 (Trypsin Digestion):使用高纯度胰蛋白酶进行深度酶解。
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肽段混合物 (Peptide Mixture):纯化肽段混合物并脱盐。
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修饰富集 (anti-K-GG enrichment):高特异性抗体磁珠高效富集修饰多肽。
- 05
质谱分析 (LC-MS/MS Analysis):基于高端 Orbitrap 高分辨质谱平台,进行 DIA 高通量定量检测。